Cinque elementi della reazione PCR
Ci sono cinque sostanze principali che partecipano al
PCR reazione: primer (i primer PCR sono frammenti di DNA e i primer per la replicazione intracellulare del DNA sono filamenti di RNA), enzimi, dNTP, stampi e tamponi (che richiedono Mg2).
Determinanti specifici di PCR Reazioni ① La combinazione specifica e corretta di primer e DNA stampo;
②Principi di accoppiamento delle basi;
③La fedeltà della reazione di sintesi della Taq DNA polimerasi;
④ Specificità e conservazione dei geni bersaglio.
La corretta combinazione di primer e modelli è la chiave. La combinazione di primer e template e l'estensione della catena di primer seguono il principio dell'accoppiamento delle basi. La fedeltà della reazione di sintesi della polimerasi e la resistenza alle alte temperature della TaqDNA polimerasi consentono di eseguire la combinazione (rinaturazione) dello stampo e del primer nella reazione a una temperatura più elevata, la specificità della combinazione è notevolmente aumentata e la frammento di gene bersaglio amplificato Può anche mantenere un alto grado di accuratezza. Quindi, selezionando la regione del gene target con elevata specificità e conservazione, il grado di specificità sarà più elevato.
Domande frequenti su PCR Reazioni 1. Falso negativo
2. Negativo
3. Falsi positivi